Wysoka produktywność „Grube prążki”
| Aplikacja | Ssaki, genotypowanie | Konstrukcja bibliotek | Produktywny PCR | Niskokopijne matryce, trudne próbki |
| Rekomendacja | Titanium® Taq | Advantage® 2 | EmeraldAmp® Max HS | TaKaRa Ex Taq® |
| Cecha | Czułość i produktywność | Długie matryce, wysoka wierność | Ergonomia pracy | Wysoka wierność i produktywność |
| Wielkość amplikonu | ||||
| gDNA | <2 kb | <6 kb | <15 kb | <20 kb |
| Plazmid lambda | <2 kb | <18,5 kb | ND | <30 kb |
| cDNA | <4 kb | <8,5 kb | ND | ND |
| Aktywność | ||||
| 5’-3’ ekgzonukleazy | Tak | Tak | ||
| 3’-5’ ekgzonukleazy | Tak | Tak | Tak | |
| Generowane końce | T/A | T/A | T/A | T/A |
| Formaty produktu | ||||
| Premiks | Tak | Dostępny | ||
| Liofilizat | Dostępny | Dostępny | ||
| Kompletny PCR kit | Dostępny | Dostępny | ||
| Dodany barwnik | Tak | Dostępny | ||
| Hot Start | Tak | Tak | Tak | Tak |
TaKaRa Titanium Taq
to niezwykły wariant polimerazy Taq z delecją na N terminalnym końcu (Barnes, 1992) i zwiększoną rozpuszczalnością. Wprowadzone modyfikacje sprawiają, że:
– możemy pracować z matrycami niskokopijnymi i otrzymujemy dużo produktu
– amplifikuje każdy DNA– wyizolowanym z baterii, plazmidowym, genomowym i cDNA
– nie trzeba optymalizować warunków reakcji – Titanium pracuje w szerokim zakresie stężenia jonów Mg2+
– otrzymujemy jeden prążek – zaopatrzenie w Hot Start niweluje powstawanie dodatkowych, niespecyficznych produktów amplifikacji
– generuje produkty do 2 kb
– Titanium jest doskonałym rozwiązaniem do reakcji typu multiplex – może pracować z tysiącami primerów jak to jest w panelach Affymetrix (CytoScan HD, CytoScan 750K Array, Genome-Wide Human SNP Array 6.0, GeneChip Human Mapping 250K/500K Array Set)
Produkt dostępny w różnych formatach – samej polimerazy z buforem, kompletnych kitów z kontrolami, liofilizatu (EcoDry shots), produktów klasy GMP i GPR (General Purpose Reagent). Idealny do pracy ręcznej jak i automatyzacji (również OEM)
 | Zobacz jak Titanium: – sprawdza się w genotypowaniu i amplifikuje 9 genów z różnicami typu SNP -> Titanium Taq outperforms other polymerases in high-throughput genotyping (takarabio.com) – pozwala wyróżnić subpopulacje komórek raka piersi -> Amplifying our understanding of breast cancer metastases (takarabio.com) |
Dostępna w wersji OEM.
Advantage 2
To blend polimeraz proofreading i Titanium przez co zapewnia znakomity balans pomiędzy wierną a wysokoproduktywną reakcją PCR. Advantage 2:
– jest doskonałym wyborem kiedy chcemy zamplifikować wiernie matryce do analiz porównawczych lub kiedy ważna jest dla nas wierność amplifikacji np. RACE, subtraction PCR, tworzenie bibliotek DNA i cDNA.
– umożliwia amplifikację matryc do 6 kb
– pozwala na otrzymanie specyficznych wyników- jest zaopatrzona w Hot Start
– dostępna w zestawach z buforami zoptymalizowanymi do pracy z matrycami bogatymi w GC (90%); o jeszcze większej wierności i w formie liofilizatu (EcoDry shots).
Amplification with the Advantage HF 2 PCR Kit. Amplification of a wide size range of cDNA and genomic fragments. Lanes 1–3: amplification of several fragments (0.5–1.8 kb) of the human cardiac beta-myosin chain from human genomic DNA. ;Lanes 4–6: amplification of several size fragments (1.0–3.5 kb) of the BPTI gene from calf thymus DNA. Lanes 7–8: amplification from Marathon-Ready Human Placenta cDNA (Cat. No. 639311). Lane 7: 1.2-kb beta-actin fragment. Lane 8: 1.3-kb TFR fragment. Lane M: 1-kb DNA size marker.
EmeraldAmp Max HS
polimeraza w dostarczana na wygodnym 2x zatężonym, kompletnym premiksie o pięknym szmaragdowym kolorze.
EmeraldAmp Max HS:
– dzięki zaopatrzeniu buforu reakcyjnego w barwnik i obciążnik znacznie przyspiesza i ułatwia pracę
– zapewnia dużą wydajność amplifikacji (10x większą niż klasyczny Taq)
– posiada aktywność proofreading, która jest rzadko spotykana w miksach tego typu
– zapewnia specyficzną amplifikację, dzięki zaopatrzeniu w Hot Start
– odpowiedni także do matryc bogatych z pary GC i AT
– generuje długie odcinki do 15 kb
– barwnik i obciążnik nie przeszkadza przy dalszej analizie miejsc cięcia enzymami restrykcyjnymi
– dobry stosunek ceny do jakości
 | Zobacz jak EmeraldAmp Max wypada: – w porównaniu z RedTaq 0 EmeraldAmp premixes outperform MyTaq Red mix for GC-rich targets (takarabio.com) |
TaKaRa ExTaq Polymerase
to blend polimeraz Takara Taq (enzymu pełnej długości) i polimerazy proofreading, przez co stanowi znacznie lepszą alternatywę dla standardowych polimeraz. Dzięki niezwykłej mieszaninie enzymów może:
– z wysoką wiernością generować matryce (4,5 x większą niż standardowy Taq, wg analiz metodą Kunkel)
– generować dużo produktu – „grube prążki”. Ponieważ z bezbłędnymi matrycami primery skuteczniej oddziałują, co pozwala na zabezpieczenie efektywności reakcji i wygenerowanie większej liczby kopii amplikonu w dalszych cyklach kopii. Zabezpieczenie efektywności reakcji ma duże znaczenie przy ilościowym PCR dlatego Ex Taq znajduje się w miksach do qPCR do pracy z sondami i SYBR.
– amplifikować długie i krótkie odcinki <100 bp – 30 kb
– pracować z tzw. trudnymi, pofragmentowanymi matrycami np. z bloczków parafinowych, roślin czy antycznym DNA
– generować powtarzalne wyniki – niezależnie od jakości matrycy i ilości
– generować inserty do bezpośredniego klonowania w wektory TA
W ciągu ostatnich 2 lat polimeraza Ex Taq pojawiła się w ponad 700 publikacjach.
Zawsze dostarczana z nukleotydami i buforem reakcyjnym. Dostępna również z HS i w premiksie. Liczba reakcji zawsze przeliczana na objętość 50 ul.
Dostępne formaty OEM.
Link -> Ex Taq DNA Polymerase (takarabio.com)
| Zobacz jak Ex Taq radzi sobie z: – krótkimi matrycami (100 bp) -> RR001A_APP2.pdf (takarabio.com) – niskokopijnymi próbkami -> RR001_Taq_ExTaq_APP1.pdf (takarabio.com) – matrycami bogatymi w GC -> RR030_APP.pdf (takarabio.com) – pozwala wykryć bakterie w wodzie ze zbiorników naturalnych -> Detecting infectious disease threats in a changing climate (takarabio.com) |
The amplification efficiencies of Takara Ex Taq HS DNA Polymerase and a high-grade hot start PCR enzyme from Company A were compared. A 7.5 kb target was amplified from increasing amounts of human genomic DNA template. Excellent sensitivity and yields were obtained with Takara Ex Taq HS enzyme. Lane M: Lambda-Hind III digest, Lane 1: 100 pg, Lane 2: 300 pg, Lane 3: 1 ng, Lane 4: 3 ng, Lane 5: 10 ng, Lane 6: 30 ng, Lane 7: 100 ng.
(Ex Taq DNA polymerase hot start version (takarabio.com))
