WEBINARIUM: A FAST AND RELIABLE METHOD FOR DETECTING SINGLE BASE EDITING DOWNSTREAM OF CRISPR/CAS9 GENOME EDITING!
26 Kwietnia 2018 (Ostatnia aktualizacja 23.10.2024)
Szanowni Państwo,
Serdecznie zapraszamy na webinarium poświęcone systemom do edycji genomu CRISPR oraz linii Guide-it™. Tym razem omówione zostanie rozwiązanie umożliwiające analizę SNP (single nucleotide polymorphisms). To pierwszy na rynku tego typu zestaw, także tym goręcej zapraszamy do oglądania.
Od czasu odkrycia możliwości, które daje edycja genomu zaczęto myśleć jak ją wykorzystać w celach terapeutycznych. Aktualnie najczęściej marzenie to urzeczywistnia się poprzez zamiany pojedynczych nukleotydów (SNP) w sekwencjach kodujących białko o zaburzonej wcześniej funkcjonalności. Naukowcy wykorzystują również CRISPR i podmianę nukleotydu w celu wygenerowania kodonu stop i wymuszenia terminacji białka. Dzięki czemu powstają mutanty pozbawione aktywnego białka, czyli knock-out. Wprowadzanie zmian bazujących na podmianie jednego nukleotydu, jest jednak bardzo trudne do weryfikacji. Zwłaszcza bez możliwości zaobserwowania jej w fenotypie. Mamy jednak na to rozwiązanie - Guide-it™ SNP Screening Kit. Będzie ono odkładnie omówione przez dr Cornelię Hampe. Kit wykorzystuje amplifikację PCR i reakcje enzymatyczne, aby zidentyfikować SNP z użyciem fluorescencyjnego pomiaru na 96 dołowej płytce. Poniżej schemat działania.
Figure 1. Schematic of the Guide-it SNP Screening Kit workflow.
| After DNA extraction and subsequent PCR amplification of the region surrounding the target site, the resulting PCR products (blue) are hybridized with two different complementary oligos—a displacement oligo (green) and a flap-probe oligo (dark/light purple) that has a fixed, noncomplementary sequence (light purple) that forms a flap. Hybridization of the oligos with the PCR product yields one of two structures depending on the outcome of the editing. When editing has occurred successfully, the flap-probe oligo forms a complete base pairing at the target site yielding a double-flap structure (bottom). Guide-it Flapase is a specific nuclease that only cleaves and releases the flap from the double-flap structure which is detected by the Guide-it Flap Detector, generating a fluorescent signal. When editing has not occurred, the flap-probe oligo does not form a complete pairing at the target site generating a gapped structure (top) that cannot be cleaved by Guide-it Flapase. In this manner, detection of a fluorescent signal using the Guide-it SNP Screening Kit is indicative of whether the desired nucleotide substitution has occurred. [FAQ] [NOTA] |
Serdecznie zapraszamy!
Zespół BIOKOM
