Odkryj z nami tajniki programu Gen5 - #1 odczyt z długością referencyjną

Gen5 to znany od lat program, który to zastąpił wcześniejsze KC Junior i KC4, towarzyszący użytkownikom czytników BioTek i Agilent Technologies w codziennej pracy. Będąc uniwersalnym programem, przeznaczonym do pracy ze wszystkimi czytnikami tych marek pozwala nie tylko na tworzenie prostych protokołów pomiarowych, ale również na przeprowadzenie pełnej kalkulacji w oparciu o uzyskane surowe dane.

Coraz popularniejszym rodzaje kalkulacji, jaki Użytkownicy pracujący z metodą ELISA muszą wykonywać jest odjęcie odczytu przy referencyjnej długości fali (zazwyczaj mieszczącej się w zakresie 620-650nm). Jak zatem przygotować taki protokół? Jest to wbrew pozorom bardzo proste.

Krok 1

Przygotowujemy krok Procedure w taki sposób, aby odczytywać dwie długości fali.

Wybieramy opcję Read, następnie stosowną metodę detekcji, tryb odczytu oraz optykę. W oknie wyboru długości fali wybieramy odczyt przy dwóch długościach i ustawiamy ich odpowiednie wartości

 

Resztę procedury jak np. dodanie kroku wytrząsania etc. ustawiamy zgodnie z wymogami protokołu testu.

Krok 2

Przechodzimy następnie do kroku Plate Layout i tworzymy mapę płytki zgodnie z wymogami danego testu.

Krok 3

Przechodzimy do kroku Data reduction. Tutaj w dużej mierze jego ostateczny wygląd będzie zależał od tego jakie kalkulacje mają być wykonane. Pamiętając o kolejności wykonywania działań przez Gen5 dodajemy stosownie np. blankowanie.

Po nim możemy przystąpić do dokonania transformacji z odjęciem odczytu przy długości fali referencyjnej. Krok ten zazwyczaj będziemy robić przed ustawienie kroku Standard Curve, w którym definiować będziemy sposób wykreślania krzywej standardowej.

Jak zatem dokonać takiej transformacji?

Po lewej stronie okna kroku Data reduction szukamy transformacji o nazwie Delta

 

Wybieramy tę opcję. Powinno nam się pokazać takie okno

 

Przy Data In 1 wybieramy zestaw danych (pomiar surowy lub po zblankowaniu), od którego będziemy odejmować, zaś przy Data In 2 wybieramy zestaw danych, który będziemy odejmować. Przykładowo, chcąc od odczytu przy długości fali 450nm skorygowanej o blank chcemy odjąć odczyt przy długości fali 630nm skorygowany o blank, to nasz krok Delta powinien zostać ustawiony w następujący sposób

 

Po dokonaniu takiej kalkulacji otrzymamy nowy zestaw danych nazwany Delta. Możemy następnie wykorzystać go przy kreśleniu krzywej wskazując, na której osi mają być odłożone te wartości. Zazwyczaj będzie to oś y

 

I to wszystko! W ten sposób właśnie możemy ustawić protokół odczytu wykorzystujący pomiar przy długości referencyjnej!

Już wkrótce kolejne wpisy poświęcone pracy z programem Gen5!