Biokoniugacja
Wprowadzenie
Biokoniugacja to chemiczne łączenie dwóch cząsteczek w celu utworzenia pojedynczej hybrydy, w której przynajmniej jeden z partnerów jest biocząsteczką. To partnerstwo jest doskonałym przejawem motta, że całość jest większa niż suma jej części. Innymi słowy, powstały produkt zachowuje aktywność każdego składnika, a jednocześnie zyskuje nową funkcję, która nie jest możliwa w przypadku żadnej z cząsteczek osobno.
Biokoniugacja zazwyczaj obejmuje dodawanie odrębnych, ale uzupełniających się grup funkcyjnych do każdej z dwóch biocząsteczek, umożliwiając im wiązanie się ze sobą. Osiąga się to poprzez proces znany jako modyfikacja, w którym łączniki są przyłączane do amin lub grup tiolowych obecnych na biocząsteczkach przed ich zmieszaniem.
Typowe przykłady biokoniugatów obejmują przeciwciała związane z fluoroforami, które mogą zarówno rozpoznawać docelowy analit, jak i generować mierzalny odczyt potwierdzający jego obecność, oraz białka przyłączone do kulek agarozowych, które można wykorzystać do immunoprecypitacji specyficznego partnera wiążącego z roztworu bez konieczności stosowania odczynników wtórnych.
Biokoniugacja wykorzystywana jest powszechnie; od wykrywania białek, poprzez izolację, na wytwarzaniu leków skończywszy.
Biokoniugacja SoluLINK®
Produkty do biokoniugacji SoluLINK® oferują unikatowe cechy, które pomagają badaczom i producentom znakować dowolne biocząsteczki w sposób spójny w ciągu 4-6 godzin. Reakcję koniugacji HyNic-4FB można śledzić spektrofotometrycznie; jest to więc też sposób mierzalny. Możliwość kontrolowania reakcji zapobiega marnowaniu cennych białek, które wytrącają się z roztworu, gdy dochodzi do nadmiernej koniugacji. Procedura pozwala na osiągnięcie standardów GMP.
Dzięki szerokiej gamie odczynników pomocniczych, SoluLINK® może pomóc w biokoniugacji wymaganej w przypadku szeregu testów, takich jak ELISA, chromatografia powinowactwa, cytometria przepływowa i testy kulkowe. Nieinwazyjna chemia, tworzenie stabilnych wiązań w temperaturze do 92°C i pH w zakresie 2-10, sprawiają, że SoluLINK® jest metodą koniugacji z wyboru.
Technologia biokoniugacji SoluLINK® została zaprojektowana do wysokowydajnej koniugacji wszystkich klas biocząsteczek, w tym przeciwciał, białek, peptydów, oligonukleotydów, węglowodanów, leków i całych powierzchni. Rezultatem jest niezawodne, mierzalne znakowanie, dostarczające gotowe do użycia koniugaty o wysokiej wydajności.
Przykłady koniugatów SoluLINK®
| Conjugate | Use |
|---|---|
| Oligonucleotide-antibody conjugates | Proximity Ligation Assays (PLA) |
| Oligonucleotide-KLH conjugates | Anti-Oligonucleotide antibody synthesis |
| Carbohydrates-KLH conjugates | Production of anti-carbohydrates antibodies |
| Bacterial carbohydrate-bead conjugates | Diagnostic assays |
| siRNA-antibody conjugates with disulfide cleavible linker | siRNA delivery |
| siRNA-cationic peptide conjugates | siRNA delivery |
| Drug-protein conjugates | Drug delivery |
| Drug-KLH conjugates | Immunodetection |
 | Łatwa w użyciu technologia Solulink oparta na linkerach.
Każdy etap koniugacji można kontrolować, aby zapewnić idealne znakowanie każdej biocząsteczki, a końcową koniugację można śledzić za pomocą spektrofotometru. Koniugaty mogą być stabilne przez 6 miesięcy po przygotowaniu i oczyszczeniu, a odczynniki znakowane 4FB są często stabilne przez wiele tygodni. (Znakowanie HyNic należy wykonać tuż przed koniugacją, aby uniknąć tworzenia dimerów). |
Odczynniki pomocnicze
Aby zapewnić maksymalną elastyczność, wiele odczynników SoluLINK® jest dostępnych jako oddzielne odczynniki, co umożliwia zbudowanie własnej koniugacji.
| A Type of conjugate | B Type of molecule | C Reactive Group | D SoluLINK Product | |
|---|---|---|---|---|
| Antibody – Protein | Ab | If using an Amino (NH2) then use: | Linker 1 | S-HyNic (S-1002-105) |
| If using a Thiol (SH2) then use: | MHPH (S-1009-010) | |||
| Protein | If using an Amino (NH2) then use: | Linker 2 | S-4FB (S-1004-105) | |
| Protein – Oligos | Protein | If using an Amino (NH2) then use: | Linker 1 | S-HyNic (S-1002-105) |
| If using a Thiol (SH2) then use: | MHPH (S-1009-010) | |||
| Oligo | If using a 3’ or 5’ Amino, then use: | Linker 2 | S-4FB (S-1004-105) | |
| Protein – MagnaLINK Beads conjugation | MagnaLINK Beads | If using 4FB Magnetic beads | Linker 1 | MagnaLINK 4FB Magnetic Beads (M-1004-010) |
| AB, other protein, R-PE, APC, perCP, HRP, AlkPhos | If using an Amino (NH2) then use: | Linker 2 | S-HyNic (S-1002-105) | |
| If using a Thiol (SH2) then use: | MHPH (S-1009-010) |
Skrócona instrukcja użycia:
technologia SoluLINK® wymaga 2 łączników, aby skutecznie skoniugować dwie biocząsteczki, co daje mierzalny, kontrolowany i stabilny wynik.
Krok 1: Wybierz typ sprzężenia (A)
Krok 2: Wybierz pierwszą biocząsteczkę (B), a następnie wybierz jej grupę reaktywną (C). Wymagany produkt SoluLINK® znajduje się w kolumnie D (Linker 1)
Krok 3: Wybierz drugą biocząsteczkę (B), a następnie wybierz jej grupę reaktywną (C). Wymagany produkt SoluLINK® znajduje się w kolumnie D (Linker 2)
Krok 4: Zamów produkty wymienione w krokach 2 i 3, aby uzyskać udaną koniugację.
Produkty ChromaLINK™
ChromaLINK™ oferuje szybki sposób znakowania białek biotyną lub digoksygeniną. Zajmuje to jedynie około 2,5 godziny. Dodatkowe 5 minut potrzeba na ilościowe, spektrofotometryczne określenie wydajności reakcji, dzięki wbudowanemu chromoforowi bis-arylohydrazonu. Istnieje szereg opcji znakowania, w zależności od wymagań rozpuszczalności białka i ilości białka, które ma zostać wyznakowane.
| Product | Size | SKU |
|---|---|---|
| Biotin | ||
| ChromaLINKTM Biotin Labelling Kit | Kit – labels 25ug to 1mg | B-9007-105K |
| ChromaLINKTM One-Shot Antibody Biotinylation Kit | Kit – labels 100ug of Ab | B-9007-009K |
| ChromaLINKTM One-Shot Antibody Biotinylation Kit (Large Scale) | Large-Scale – labels 2mg of Ab | B-9007-020K |
| ChromaLINKTM One-Shot Antibody Biotinylation Kit (Custom Size) | Labels any amount | please inquire |
| ChromaLINKTM Biotin Labelling Reagent (Sulfo Version Water Soluble) | 10mg | B-1007-110 |
| ChromaLINKTM Biotin Labelling Reagent (Sulfo Version Water Soluble) | 5 x 1.0mg | B-1007-105 |
| ChromaLINKTM Biotin Labelling Reagent (DMF Soluble) | 10mg | B-1001-010 |
| ChromaLINKTM Biotin Labelling Reagent (DMF Soluble) | 5 x 1.0mg | B-1001-105 |
| ChromaLINKTM Biotin Malemide Reagent | 10mg | B-1012-010 |
| Digoxigenin | ||
| ChromaLINKTM Digoxigenin One-Shot Antibody Labelling Kit | Kit – labels 100ug of Ab | B-9014-009K |
| ChromaLINKTM Digoxigenin One-Shot Antibody Labelling Kit | Large-Scale – labels 2mg | B-9014-020K |
Kompletne Zestawy
Zestawy zawierające wszystkie niezbędne elementy, aby w prosty sposób znakować i oczyszczać białko przy użyciu technologii SoluLINK® lub ChromaLINK™.
| Product | Size | SKU |
|---|---|---|
| HRP- Antibody All-In-One Conjugation Kit | Kit- conjugates 2x 100µg Ab | A-9002-001 |
| R-PE- Antibody Conjugation Kit | Kit- conjugates 2x 0.5mg Ab | P-9002-002 |
| Protein-Protein Conjugation Kit | Kit- labels 2x 650µg of protein (>7kDa) | S-9010-1 |
| Protein -Oligo Conjugation Kit | Kit- labels 2x 650µg of protein to Oligo (20-120 nucleotides) | S-9011-1 |
| Fluorescein One-Shot Antibody Labelling Kit | Kit- labels 2x 100µg of Ab | F-9001-009K |
| ChromaLINK ™ Biotin Labelling Kit | Kit -Labels 25µg to 1mg | B-9007-105K |
| ChromaLINK™ One-Shot Antibody Biotinylation Kit | Kit – Labels 100µg of Ab | B-9007-009K |
| ChromaLINK ™ Digoxigenin One-Shot Antibody Labelling Kit | Kit – Labels 100µg of Ab | B-9014-009K |
Kulki magnetyczne
Kulki magnetyczne SoluLINK® NanoLINK zostały zaprojektowane z unikalnym usieciowaniem streptawidyną, aby zapewnić najwyższą pojemność wiązania biotyny dla swoich rozmiarów nawet 12x wyższą niż w przypadku konkurencyjnych rozwiązań.
Zaprojektowane do stosowania w takich zastosowaniach, jak separacja komórek oparta na przeciwciałach, projektowanie testów immunologicznych, izolacja białek wiążących ChIP i DNA/RNA , immunoprecypitacja i izolacja białek oraz wzbogacanie targetów w sekwencjonowaniu nowej generacji.
| Molecule | NanoLINK (0.8um) binding capacity | MagnaLINK (2.8um) binding capacity |
|---|---|---|
| Free Biotin | >14 nmol/mg | >12 nmol/mg |
| Biotinylated oligo (23-mer) | >2.5 nmol/mg | >0.8 nmol/mg |
| Biotinylated IgG (3 biotins per IgG) | >250 ug/mg | >112.6 ug/mg |
Kulki MagnaLINK® oferują wyjątkową jednorodność rozmiaru i są gotowe do kowalencyjnej immobilizacji w ramach zdefiniowanych przez użytkownika, wysoko wydajnych schematów oczyszczania metodą powinowactwa.
Kulki magnetyczne 4FB MagnaLINK® oferują alternatywę dla wiązania biotyny, wykorzystując metodę SoluLINK®. W porównaniu z innymi istniejącymi metodami, gwarantuje to wydajny sposób na koniugację kulek z dowolnymi białkami i przeciwciałami znakowanymi HyNic.
